Il existe différents critères ;
1) détermination du CBC (comptage du sang complet)
- Comptage des GR (µl)
- Quantifier la quantité d'Hb en gr/dl de sang.
- Quantifier le volume globulaire (hématocrite/ 100 ml de sang total)
2) indices érythrocytaires
- MCV ; volume corpusculaire moyen
- MCH ; hémoglobine corpusculaire moyenne (pico gr/GR)
- MCHC ; concentration en hémoglobine corpusculaire moyenne (%/100ml de contenu)
3) Aspect, forme, volume.
4) Dosage de l'hémoglobine libre dans le plasma. (hémoglobinémie)
1 ) CBC : Complete Blood Count. Comptage du sang complet .
a) Valeurs normales .
| |
Nombre de GR
(million/µl)
|
Hématocrite
(%)
|
Hémoglobine
(gr/dl sang)
|
|
Chien
|
6,8
|
45
|
15
|
|
Chat
|
7,5
|
37
|
12
|
|
Bovin
|
7
|
34
|
11
|
b) Variations normales.
Ø Milieu.
L'altitude augmente le nombre de globules rouges et augment par conséquent le CBC.
Ø Laboratoire.
Il faut toujours envoyer les échantillons au même labo...
Ø Causes physiologiques.
- L'âge.
Chez le chiot, jusqu'à l'âge de 3 semaines, les globules rouges sont plus gros. Le nombre de globules rouges et l'hématocrite augmentent jusqu'à l'âge de 6 mois.
- La race.
Par exemple, chez le cheval, il ya des différences entre le cheval de trait et le cheval de
course.
- Les manipulations de l'animal.
Lorsque l'on fait une prise de sang sur un cheval, il vide sa rate, ce qui augmente le nombre de GR circulants et peut augmenter l'hématocrite jusqu'à 60%. Il faut donc standardiser la manipulation : on fait d'abord courir le cheval jusqu'à ce qu'il atteigne 100 pulsations cardiaques / min. On attend 30 secondes puis on fait la prise de sang.
c) techniques.
Ø Numération.
- Hématimètre .
On dilue le sang dans une cellule, on laisse sédimenter et on compte les GR. L'erreur est de l'ordre de 20%...
- Coulter counter .
On dilue le sang, on le fait passer dans un capillaire (1 GR à la fois) où passe un courant continu. La conduction est plus rapide dans le GR que dasn le solvant et chaque fois qu'un GR passe, il y a un pic électrique.
Ø Dosage de l'hémoglobine.
- Méthode de l'hématurie acide .
Suite au mélange de l'Hb et d'HCl dilué, on mesure l'intensité de la coloration au colorimètre et on compare à un étalon.
- Echelle de Talquist .
On compare la couleur du sang (l'intensité du rouge est proportionnel à la quantité d'Hb) à une coloration étalon (erreur de 10 à 40 %).
- Hémoglobinomètre de Spencer.
Se base sur la destruction de l'oxyhémoglobine. Peu précis.
- Méthode à la cyanométhémoglobine (la plus précise) .
On mélange l'hémoglobine à du cyanate ce qui la transforme en cyanométhémoglobine puis on lit à 540nm.
Ø Hématocrite.
C'est la détermination du pourcentage de sang qui est formé d'hématies.. c'est l'équivalent du Volume Globulaire Total (VGT).
- Microhématimètre.
C'est un tube capillaire : L=7cm, Diam = 1 mm erreur de 2 à 8,5%
On dépose l'extrémité du tube dans le sang qui monte par capillarité. On centrifuge à 3000 tours pendant 10 minutes. Les globules blancs sont difficilement visibles et une mauvaise centrifugation (trop lente) peut modifier la valeur de l'hématocrite...
1. Les indices érythrocytaires .
Ils sont calculés à partir du CBC.
a) MCV : Mean Corpuscular Volume = Volume Corpusculaire Moyen.
Exemple : Si l’hématocrite (=VGT) = 45% cela veut dire qu’il y a 450 ml de GR dans 1 litre
de sang. ( 0,45 l de GR /litre de sang = 450 x 10-3 litre de GR dans 1 litre de sang.
La numération donne 5 millions de GR/mm3 ou /µl,
Donc, dans 1 litre il y a 5 millions x 1 million, c-à-d 5 x 10 12 hématies .
b) MCH : Mean Corpuscular Hémoglobine = Hémoglobine corpusculaire moyenne.
Exemple : Hématocrite = 45%
Taux d'hémoglobine = 15 gr Hb/dl = 150 gr Hb/l
Numération = 5 x 106 GR/mm3 = 5 x 1012 GR/ litre (1 mm3 = 1 µl)
c) MCHC : Mean Corpucular Hémoglobine Concentration = Concentration Corpusculaire Moyenne en Hémoglobine .
d) Valeurs normales
| |
MCV
µ3 ou fl
|
MCH
picogr
|
MCHC
%
|
|
Bovin
|
40-60
|
11-17
|
26-34
|
|
Chien
|
60-77
|
19-25
|
31-34
|
|
Chat
|
39-35
|
13-17
|
31-34
|
e) Classification des anémies.
REMARQUES :
- On peut avoir un MCHC normal (c-à-d une teneur normale en hémoglobine) mais une quantité d'Hb trop grande (c-à-d trop de picogr) causée par un volume corpusculaire trop grand >>> C'est une anémie macrocytaire normochrome. 
- Le plus souvent, on a une anémie normochrome normocytaire, c-à-d une teneur en Hb normale et un volume globulaire normal. Ceci est du à une diminution du nombre de GR à cause d'un problème au niveau de la moelle osseuse (hypoplasie médullaire). Mais elle ne dépend pas de l'érythropoïèse car le GR est normal.
- On peut rencontrer une anémie hypochrome microcytaire suite à une carence en vitE, en vitB6 ou lors d'hémorragie chronique.
- Les anémies macrocytaires sont souvent hypo ou normochromes.
2. Autres méthodes d'évaluation .
a) Vitesse de sédimentation globulaire (VS)
Normalement la vitesse de sédimentation est très lente sauf dans certains cas ;
- Si une inflammation, une nécrose ou une dégénérescence, si l'animal a ingéré des substances toxiques (qui provoquent une nécrose), il se produit des modifications physico-chimiques du plasma et des GR (qui s'organisent en rouleaux, ce qui augmente la vitesse de sédimentation.
- Chez les animaux anémiques,(c-à-d hématocrite trop faible), la VS augmente.
b) Morphologie des hématies.
Ø Aspect des globules rouges .
La membrane du GR est constitué d'une double couche lipidique de protéines intrinsèques et extrinsèques internes ou externes. Elle contient 15% de cholestérol.
Il existe des enzymes qui échange le cholestérol avec le sang. Si le cholestérol sanguin augmente, son intégration dans la membrane augmente. Ce phénomène est favorisé par les sels biliaires présents dans le sang.
Lors de maladie hépatique, il y a augmentation des sels biliaires et l'on retrouve des globules rouges particuliers ; les « targets cells »
Le globule rouge à la forme d'un « beignet troué ». Il contient un cytosquelette protéique sous membranaire. Des ankyrines sont des molécules entre lesquelles il existe des structures filamenteuses, les molécules de spectrine . Cet ensemble concourt à la formation d'un réseau colloïdal (gel).
Le globule rouge est entouré de 3 membranes coulissant les unes sur les autres. On retrouve 2 couches externes de nature phospholipidique et une couche interne formée d'un gel protéique.
On a constaté qu'il existait 3 formes possibles pour les globules rouges :
Ø Un peu de terminologie...
1) Anisocytose :
C'est la présence de globules rouges de taille variable. C'est physiologique chez le porc.
Si on ce trouve dans le cadre d'une pathologie, c'est un signe de régénérescence car des cellules mûres sont envoyées précipitamment dans le sang périphérique.
2) Poïkilocytose .
C'est la présence de globules rouges de forme anormale. Cela indique soit des modifications importantes du milieu interne (protéines, pH...), soit une CIVD. On retrouve ce phénomène de poïkilocytose dans les maladies graves.
3) Polychromasie .
C'est la présence de globules rouges de couleur variable. Les couleurs varient du bleu au rouge. Cela indique un phénomène de régénération ; les cellules bleues, plus volumineuses et plus rondes sont des réticulocytes.
4) Corps de Howell-Jolly .
Ce sont des restes de noyaux dans le globule rouge (dans le réticulocyte on retrouve des restes de RER et d'ADN...). Ces corps de Howell-Joly apparaissent comme un point très dense et souvent excentrique. Il y a eu une stimulation de la moelle et les débris de noyau n'ont pas eu le temps d'êtres expulsés.C'est un moins bon critère que les réticulocytes pour indiquer une surstimulation...
5 ) Corps de Heinz .
On retrouve des endroits réfringents dans les globules rouges. Cela correspond à une précipitation de l'Hb oxydée. Cela peut être du a des toxiques oxydants. Cela peut être physiologique chez le chat.
6 ) Leptocytose .
C'est la présence de cellules possédant trop de membrane, ce qui donne des formes anormales sur frottis. Cela est du à une diminution de la souplesse de la membrane. (cette forme se différencie des targets cells où en plus du repli périphérique, il y en a un central.
On retrouve cette forme lors de maladies hépatiques et lors de déficience en ATP qui entraîne une perte de fluidité des membranes.
7 ) Macrocytose .
C'est un globule rouge trop gros. On retrouve cette forme lors de :
- stimulation importante de la moelle osseuse. Les cellules ont sauté l'une ou l'autre division mais sont à maturation quand même.
- Hémorragie.
- Déficience en VitB12 ce qui entraîne un arrêt de la production de GR au niveau de la moelle osseuse.
8 ) Microcytose .
On les observe lors de déficience en fer.
9 ) Métarubricytes .
Ils ressemblent aux autres globules rouges, parfois un peu plus grands, mais présentent un noyau noir très dense. On les retrouve lors de ;
- forte stimulation médullaire.
- Lésions de la barrière de perméabilité de la moelle osseuse ; septicémie, leucémie..
- Lors de stresss chez le chat.
10 ) Acanthocytes.
Ce sont des formes à énergie moindre. L'aspect est celui d'une étoile à bords arrondis. On retrouve cette forme lors de maladies rénales car il y a des désordres osmotiques au niveau sanguin.
Bien différencier cette forme de la crénation qui correspond à un artéfact de mauvaise fixation et se présente sous forme d'une étoile à bouts pointus et non arrondis.
c) Résistance globulaire.
On met des GR dans des solutions salines de moins en mois isotoniques (c-à-d de plus en plus hyportoniques).
L'eau pénètre donc dans le GR et on regarde à quelle hypotonicité le GR éclate. La résistance globulaire minimale est la concentration à laquelle il commence à y avoir hémolyse.
La résistance globulaire maximum est la concentration à laquelle l'hémolyse est totale.
